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Enzymes pour la caractérisation approfondie des anticorps

Les anticorps thérapeutiques utilisés comme produits biopharmaceutiques sont des molécules très complexes qui nécessitent une surveillance et un contrôle stricts pendant la fabrication. En raison de leur nature de médicament biologique, la sécurité des médicaments et la variation innée des méthodes de production sont toujours une source d'inquiétude. Il convient donc d'appliquer une série de flux de travail pour une caractérisation analytique complète et approfondie afin d'analyser et de caractériser la qualité du produit.
Les approbations de produits à base d'anticorps monoclonaux augmentant considérablement chaque année, tels que les AcM, les fusions Fc, les Fab, les conjugués anticorps-médicaments, les AcM bispécifiques (bsAbs) et les engageurs bispécifiques de cellules T (BiTE), la compréhension des modifications post-translationnelles individuelles (PTM) peut permettre de mieux comprendre et prédire l'efficacité in vivo , la pharmacocinétique et le mécanisme d'action des AcM produits.
La caractérisation des AcM est généralement réalisée sous plusieurs angles, de l'analyse descendante (structure globale) à l'analyse ascendante (séquençage des peptides), en passant par l'analyse intermédiaire (Fc, Fv, PTM).
Pour faciliter les méthodes de caractérisation des anticorps, ACROBiosystems a développé une série d'enzymes pour aider à la caractérisation des anticorps et de leurs PTM.

Liste des produits

Product DetailsCat. No.Unit Definition
Endo H (500U/μl)ENH-S5116One unit is defined as the amount of enzyme required to remove >95% of the carbohydrate from 10µg of denatured RNase B in 1 hour at 37°C in a total reaction volume of 10µl.
Endo S (200U/μl)ENS-S5143One unit deglycosylates ≥ 95% of 1 μg human IgG, when incubated in 10 mM sodium phosphate, 150 mM NaCl, pH7.4 at 37°C for 30 min.
SpeB (40U/μl)SPB-S5115One unit digests ≥ 95% of 1 µg human IgG1 when incubated in PBS ith 5 mM DTT or TCEP, pH 7.4 at 37°C for 1 hour.
IdeS (20U/μl)IDS-S5143One unit digests ≥ 95% of 1 μg human IgG when incubated in 10 mM sodium phosphate, 137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, pH7.4 at 7°C for 30min.

Outils pour l'analyse des glycanes

Outils pour l'analyse des glycanes
La structure et le type de glycanes liés à l'azote peuvent affecter l'immunogénicité, la pharmacocinétique et la pharmacodynamique des protéines thérapeutiques telles que les anticorps monoclonaux (AcM) et les protéines de fusion Fc. Des enzymes telles que Endo H et Endo S permettent d'obtenir des clivages spécifiques des glycanes liés à l'azote en vue d'une analyse ultérieure.

Endo H (500U/μl) (Cat .No. ENH-S5116)

Application:

L'endo H clive les oligosaccharides hybrides ou à haute teneur en mannose liés à l'asparagine (N-liés), mais pas les oligosaccharides complexes.
Clivage de N-glycanes hybrides ou à haute teneur en mannose

Endo H (500U/μl) (Cat .No. ENH-S5116)

Caractéristiques des produits:

Action sélective : Ne clive pas les glycanes complexes
Pureté ≥95%, déterminée par SDS-PAGE
PH optimal: 5-6
Temps de réaction : 1 h

Endo S (200U/μl) (Cat .No. ENS-S5143)

Application:

Endo S clive préférentiellement les oligosaccharides complexes et évite de cliver les oligosaccharides hybrides ou à haute teneur en mannose liés à l'asparagine (liés à l'azote).
Clivage des glycanes complexes, activité limitée sur les glycanes à haute teneur en mannose et les glycanes de type hybride.

Endo S (200U/μl) (Cat .No. ENS-S5143)

Caractéristiques des produits:

Endoglycosidase spécifique à l'IgG très efficace
Pureté ≥95% déterminée par SDS-PAGE
Temps de réaction : 30 min

Fragmentation de la sous-unité de l'anticorps

SpeB (40U/μl) (Cat. No. SPB-S5115)

Application:

L'enzyme SpeB digère l'IgG pour générer des fragments Fab et Fc. Les fragments Fab purifiés et homogènes peuvent être utilisés dans de nombreuses applications :
Étude de la liaison monovalente des fragments Fab à l'antigène.  
Élimination des fonctions effectrices médiées par le Fc.
Réduction de la liaison non spécifique due aux interactions Fc.
 

SpeB (40U/μl) (Cat. No. SPB-S5115)

Caractéristiques des produits:

Site de clivage (IgG1 humaine) : KTHT / CPPCPAP (au-dessus de la charnière)
Temps de réaction : 60 min

IdeS (20U/μl) (Cat. No. IDS-S5143)

Application:

La protéase IdeS clive spécifiquement les IgG sous la région charnière en fragments F(ab')2 et Fc.

IdeS (20U/μl) (Cat. No. IDS-S5143)

Caractéristiques des produits:

Site de clivage (IgG1 humaine) : CPAPELLG / GPSVF (sous la charnière)
Temps de réaction : 30 min
 
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